c-Maf Plasmídeo de ativação de CRISPR (m2): sc-421531-ACT-2

O gene Maf do camundongo codifica o fator de transcrição c-Maf, um regulador do tipo zíper de leucina básico (bZIP) que se liga a elementos de reconhecimento MAF para controlar programas de expressão gênica dependentes do contexto. O c-Maf integra sinais de vias imunológicas e do desenvolvimento para modular a diferenciação e a função celulares, incluindo a polarização de células T (notadamente os programas Th2 e Tfh), estados de ativação de macrófagos e redes transcricionais específicas de linhagem em tecidos como o cristalino e as ilhotas pancreáticas. A atividade desregulada de c-Maf tem sido associada a alterações na homeostase imune e a fenótipos inflamatórios, sendo frequentemente estudada em modelos de transformação linfoide e de disfunção metabólica ou ocular. A edição gênica de Maf em células murinas ou em camundongos permite dissecar mecanisticamente o uso de enhancers, os circuitos transcricionais e citocinas e marcadores de linhagem a jusante, usando abordagens baseadas em CRISPR de knockout, knock-in ou perturbação regulatória, acopladas a RNA-seq, ChIP-seq e perfilamento de célula única.

c-Maf O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m2) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Maf sem alterar a sequência de ADN subjacente.

c-Maf O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m2) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Maf em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Maf, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de c-Maf. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Maf nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de c-Maf no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via c-Maf em células tumorais com expressão de Maf silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.