Plasmide CRISPR d'Activation (h) c-Fos: sc-400009-ACT

FOS code pour c-Fos, un facteur de transcription de réponse immédiate (« immediate early ») qui réagit rapidement à des signaux extracellulaires tels que les facteurs de croissance, les cytokines et l’activité neuronale. En tant que composant central du complexe AP-1, c-Fos s’hétérodimérise avec des protéines de la famille JUN pour réguler des programmes contrôlant la prolifération, la différenciation, l’apoptose et les réponses au stress, en aval des voies MAPK/ERK, JNK et p38. La transcription dépendante de c-Fos influence des voies inflammatoires et immunitaires et intègre des signaux dépendant du calcium et des kinases dans divers types cellulaires. Une expression dérégulée de FOS ou une activité anormale d’AP-1 est associée à la transformation oncogénique, à l’invasion et à la résistance aux traitements, et est également impliquée dans des phénotypes liés à la neuroplasticité ainsi que dans des mécanismes de maladies inflammatoires.

c-Fos Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FOS sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

c-Fos Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FOS dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FOS, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de c-Fos. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FOS natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de c-Fos au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie c-Fos dans les cellules tumorales présentant une expression de FOS silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.