BMPR-II Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400895-ACT

BMPR2 codifica o receptor do tipo II de proteína morfogenética óssea (BMPR-II), um receptor quinase de serina/treonina que se liga a ligantes BMP e forma complexos heteroméricos com receptores do tipo I para iniciar a sinalização canônica via SMAD1/5/8, bem como vias não canônicas de MAPK e do citoesqueleto. Por meio dessas cascatas, o BMPR-II regula decisões de destino celular, incluindo proliferação, diferenciação, migração e apoptose, com papéis proeminentes na homeostase vascular e no padrão do desenvolvimento. Alterações na expressão ou na sinalização de BMPR2 desestabilizam o equilíbrio da rede BMP/TGF-β e são frequentemente estudadas em contextos de disfunção endotelial, remodelamento anômalo de músculo liso e defeitos congênitos de sinalização. Assim, o BMPR-II é um nó-chave para estudos mecanísticos de programas transcricionais induzidos por BMP e de interações entre vias (cross-talk) em células humanas.

BMPR-II O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de BMPR2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

BMPR-II O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus BMPR2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição BMPR2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de BMPR-II. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus BMPR2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de BMPR-II no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via BMPR-II em células tumorais com expressão de BMPR2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.