Plásmido CRISPR de Activación (m) Bex4: sc-436560-ACT

Mouse Bex4 (brain expressed X-linked 4) codifica una proteína pequeña, mayormente neuronal, implicada en programas de transcripción regulados durante el desarrollo y en la diferenciación neuronal. Como miembro de la familia BEX, Bex4 está vinculada a redes de señalización y de respuesta al estrés que determinan la supervivencia celular y la especificación de linaje, con interacciones dependientes del contexto que, según se ha descrito, influyen en vías asociadas a neurotrofinas. Su expresión está enriquecida en el cerebro y en otros contextos neuroectodérmicos, lo que hace de Bex4 un nodo útil para estudiar la maduración neuronal, la dinámica de axones y dendritas, y la regulación génica dependiente de la actividad. Los patrones de expresión desregulados de la familia BEX se han asociado con fenotipos del neurodesarrollo y con estados transcripcionales relacionados con el cáncer, lo que respalda investigaciones mecanísticas sobre cómo Bex4 modula transiciones de estado celular.

Bex4 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Bex4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Bex4 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Bex4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Bex4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Bex4. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Bex4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Bex4 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Bex4 en células tumorales con expresión de Bex4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.