beta 1 Sodium Potassium ATPase/ATP1B1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401093-ACT

ATP1B1 codifica a subunidade beta 1 da Na⁺/K⁺-ATPase, um complexo de ATPase do tipo P localizado na membrana plasmática que mantém gradientes eletroquímicos ao acoplar a hidrólise de ATP ao transporte de Na⁺ e K⁺. Ao sustentar o potencial de membrana e o equilíbrio osmótico, ATP1B1 influencia a polarização epitelial, a organização das junções estreitas e processos de transporte ativo secundário que dependem de gradientes iônicos. A função da Na⁺/K⁺-ATPase se integra a vias de sinalização, incluindo cascatas dependentes de Src e programas mais amplos de resposta ao estresse que conectam a homeostase iônica ao crescimento e à diferenciação. A desregulação da expressão de ATP1B1 ou do equilíbrio entre subunidades da Na⁺/K⁺-ATPase tem sido associada a alterações na função de barreira e a fenótipos celulares relevantes para a biologia renal, cardiovascular e do câncer.

beta 1 Sodium Potassium ATPase/ATP1B1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ATP1B1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

beta 1 Sodium Potassium ATPase/ATP1B1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ATP1B1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ATP1B1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de beta 1 Sodium Potassium ATPase/ATP1B1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ATP1B1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de beta 1 Sodium Potassium ATPase/ATP1B1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via beta 1 Sodium Potassium ATPase/ATP1B1 em células tumorais com expressão de ATP1B1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.