BECN1/Beclin-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400139-ACT

BECN1 codifica a Beclin-1, um andaime central dos complexos de fosfatidilinositol 3-quinase de classe III (PI3KC3/VPS34) que iniciam a nucleação do autofagossomo e regulam o tráfego endossomal. Por meio de interações com ATG14, UVRAG e proteínas da família BCL2, a Beclin-1 integra a detecção de nutrientes e sinais de estresse para controlar o fluxo autofágico, o controle de qualidade de organelas e respostas imunes inatas. Alterações na atividade de BECN1 têm sido associadas à desregulação da proteostase e da inflamação na biologia do câncer, na neurodegeneração e em modelos de doenças infecciosas. Como regulador nodal da autofagia, a Beclin-1 é amplamente utilizada para investigar a comunicação cruzada entre autofagia, apoptose e vias de sinalização mediadas por vesículas.

BECN1/Beclin-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de BECN1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

BECN1/Beclin-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus BECN1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição BECN1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de BECN1/Beclin-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus BECN1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de BECN1/Beclin-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via BECN1/Beclin-1 em células tumorais com expressão de BECN1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.