Plásmido Doble Nickase (h) BCMA: sc-403058-NIC

TNFRSF17 codifica el antígeno de maduración de células B (BCMA), un miembro de la superfamilia de receptores de TNF que se expresa predominantemente en células B en etapas tardías y en células plasmáticas. BCMA se une a APRIL y BAFF para activar NF-κB y programas de supervivencia relacionados que sostienen el mantenimiento de las células secretoras de anticuerpos, la producción de inmunoglobulinas y la longevidad de las células plasmáticas dentro del nicho de la médula ósea. La desregulación de la señalización y la expresión de BCMA está estrechamente vinculada a una expansión anómala de células plasmáticas y a patología del linaje B, lo que lo convierte en un nodo clave para estudiar la inmunidad humoral, la diferenciación de células B y las vías de supervivencia dependientes del microambiente. Como receptor de superficie con ligandos y efectores aguas abajo bien definidos, BCMA ofrece una diana manejable para investigar la señalización mediada por receptores y las respuestas transcripcionales en células inmunitarias humanas.

BCMA El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus TNFRSF17 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de TNFRSF17. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de TNFRSF17. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con TNFRSF17 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.