BCMA CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403058-ACT

TNFRSF17 kodiert das B‑Zell-Reifungsantigen (BCMA), ein Mitglied der TNF-Rezeptor-Superfamilie, das überwiegend auf B‑Zellen im späten Entwicklungsstadium und auf Plasmazellen exprimiert wird. BCMA dient als Rezeptor für APRIL (TNFSF13) und BAFF (TNFSF13B) und koppelt die Ligandenbindung an NF‑κB und verwandte Überlebens-Signalprogramme, die die Differenzierung zu Plasmazellen, die Immunglobulinproduktion und eine langlebige humorale Immunität unterstützen. Eine dysregulierte BCMA-Signalgebung und -Expression steht in engem Zusammenhang mit einer gestörten Plasmazell-Homöostase und wird häufig im Kontext des Multiplen Myeloms und anderer B‑Linien-Malignome untersucht. Als linienrestriktiver Rezeptor wird BCMA zudem als molekularer Ansatzpunkt genutzt, um Plasmazellbiologie, Immunregulation und Tumor‑Mikroumgebungs-Interaktionen zu untersuchen.

BCMA Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen TNFRSF17-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

BCMA Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des TNFRSF17-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der TNFRSF17-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen BCMA-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native TNFRSF17-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von BCMA-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des BCMA-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem TNFRSF17-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.