Partículas Lentivirales de Activación (m) B7-2: sc-419575-LAC

Cd86 codifica el receptor coestimulador B7-2 (CD86), una glucoproteína de membrana de tipo I expresada principalmente en células presentadoras de antígeno como células dendríticas, macrófagos y linfocitos B. B7-2 se une a CD28 para promover la activación de las células T, la producción de citocinas y la expansión clonal, mientras que su interacción con CTLA-4 contribuye a la retroalimentación negativa y a la tolerancia periférica. A través de estos puntos de control receptor–ligando, CD86 ayuda a moldear las respuestas inmunitarias adaptativas e influye en programas de señalización asociados con la activación de NF-κB y la reprogramación inmunometabólica durante la presentación de antígenos. La expresión desregulada de CD86 se estudia ampliamente en contextos inflamatorios y autoinmunes, en inmunología del trasplante, en infecciones y en la evasión inmunitaria tumoral, donde la coestimulación alterada puede desplazar el equilibrio entre células T efectoras y reguladoras.

Las partículas de activación lentiviral B7-2 (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Cd86 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral B7-2 (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Cd86, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de B7-2. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Cd86 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.