Plásmido Doble Nickase (m) B7-1: sc-419570-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)B7-1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa B7-1 (m) y el plásmido de doble nickasa B7-1 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Cd80. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: B7-1 Anticuerpo (F-7): sc-376012
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) B7-1 | sc-419570-NIC | 20 µg | $410.00 |
El Cd80 de ratón codifica el ligando coestimulador B7-1, una glicoproteína de superficie expresada principalmente por células presentadoras de antígeno que modula el cebado (priming) de las células T y su función efectora mediante interacciones con CD28 y CTLA-4. La señalización de CD80 contribuye a la formación de la sinapsis inmunológica, la producción de citocinas y la tolerancia periférica, integrándose con vías que moldean la inmunidad adaptativa y las respuestas inflamatorias. La expresión alterada de Cd80 se estudia con frecuencia en contextos de autoinmunidad, inflamación crónica, inmunidad en trasplantes y evasión inmunitaria tumoral, donde el equilibrio coestimulador influye en los fenotipos de enfermedad. Dado que la regulación de la familia B7 se cruza con la presentación de antígeno y la biología de los checkpoints, Cd80 es un objetivo habitual para estudios mecanísticos de activación y supresión inmunitaria en modelos murinos.
B7-1 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Cd80 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Cd80. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Cd80. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Cd80 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.