Plásmido Doble Nickase (m) ATF-6α: sc-432646-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)ATF-6α consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa ATF-6α (m) y el plásmido de doble nickasa ATF-6α (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Atf6. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: ATF-6α Anticuerpo (F-7): sc-166659
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) ATF-6α | sc-432646-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) ATF-6α | sc-432646-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El factor activador de la transcripción 6 (Atf6) codifica ATF-6α, un factor de transcripción bZIP transmembrana residente en el retículo endoplásmico (RE) que actúa como sensor principal de la acumulación de proteínas mal plegadas. Durante el estrés del RE, ATF-6α se transporta al aparato de Golgi para una proteólisis intramembrana regulada, liberando un fragmento nuclear que induce programas transcripcionales que controlan la proteostasis, incluidos chaperonas del RE, componentes de la degradación asociada al RE y genes del metabolismo lipídico. ATF-6α funciona dentro de la respuesta a proteínas mal plegadas junto con la señalización de IRE1/XBP1 y PERK/eIF2α para restaurar la homeostasis del RE y coordinar un remodelado adaptativo. La actividad desregulada de ATF6 se ha vinculado con la patobiología asociada al estrés crónico del RE, incluida la disfunción metabólica, procesos neurodegenerativos y fenotipos cardiovasculares, lo que convierte a Atf6 en un nodo ampliamente utilizado para estudios mecanísticos de señalización de estrés.
ATF-6α El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Atf6 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Atf6. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Atf6. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Atf6 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.