ATF-2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-416662-NIC

ATF2は、活性化転写因子2（ATF-2）をコードしており、ATF-2はbZIP型転写因子としてAP-1ファミリーのメンバーとホモ二量体またはヘテロ二量体を形成し、刺激応答性遺伝子の発現を制御します。ATF-2は、JNKやp38を含むストレス活性化型MAPK経路の下流でリン酸化されることで活性化され、細胞外ストレス、DNA損傷シグナル、炎症性刺激を、増殖・アポトーシス・分化を制御する転写プログラムへと結び付けます。サイトカイン発現、細胞周期制御因子、クロマチン関連過程の調節を介して、ATF-2は酸化ストレスおよび遺伝毒性ストレスに対する細胞の適応に影響を及ぼします。ATF-2活性の破綻は、がん化シグナル、転移能、免疫応答やストレス応答の変容に関与するとされており、腫瘍生物学やストレス経路の再配線の機構研究において重要な標的です。

ATF-2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ATF2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ATF2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ATF2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ATF2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。