Aquaporin 5/AQP5 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400567-ACT

AQP5 codifica a aquaporina 5, um canal de água de membrana que facilita o transporte rápido de água, impulsionado osmoticamente, através da membrana plasmática em epitélios secretores. Ela sustenta a homeostase de fluidos e a secreção em tecidos como as glândulas salivares e lacrimais e as vias aéreas, contribuindo para a função de barreira epitelial e para a regulação da hidratação da mucosa. A localização e a abundância de AQP5 são reguladas dinamicamente por vias de sinalização que controlam o tráfego de membrana e a disponibilidade do canal dependente de fosforilação, ligando-a ao movimento de íons e água durante a secreção glandular. A desregulação da expressão de AQP5 tem sido associada a alterações no equilíbrio do líquido de superfície das vias aéreas, ao remodelamento epitelial inflamatório e à disfunção glandular, o que motiva estudos mecanísticos em biologia respiratória e exócrina.

Aquaporin 5/AQP5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de AQP5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Aquaporin 5/AQP5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus AQP5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição AQP5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Aquaporin 5/AQP5. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus AQP5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Aquaporin 5/AQP5 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Aquaporin 5/AQP5 em células tumorais com expressão de AQP5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.