Plásmido CRISPR de Activación (h) Aquaporin 4/AQP4: sc-400258-ACT

AQP4 codifica la acuaporina-4, el principal canal de agua en los pies perivasculares de los astrocitos y en otras membranas polarizadas, donde media un flujo de agua rápido y bidireccional a través de la membrana plasmática. Mediante el acoplamiento del movimiento osmótico de agua con la amortiguación de K+ y la dinámica de fluidos perivasculares, AQP4 contribuye a la homeostasis hídrica cerebral, la depuración glinfática y la regulación del volumen del espacio extracelular. Su localización en dominios perivasculares y subpiales a través de complejos asociados a distrofina vincula a AQP4 con el andamiaje de membrana y las interacciones astroglía–neurovasculares. La expresión alterada o la deslocalización de AQP4 se estudian en contextos de edema cerebral, disfunción de la barrera hematoencefálica, neuroinflamación y mecanismos de enfermedades desmielinizantes.

Aquaporin 4/AQP4 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de AQP4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Aquaporin 4/AQP4 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus AQP4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional AQP4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Aquaporin 4/AQP4. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo AQP4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Aquaporin 4/AQP4 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Aquaporin 4/AQP4 en células tumorales con expresión de AQP4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.