Aquaporin 3/AQP3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400636-ACT

O AQP3 humano codifica a aquaporina 3, um canal de membrana que facilita o transporte de água e glicerol através das membranas de células epiteliais e imunológicas, influenciando o equilíbrio osmótico e o metabolismo celular. Ao regular o fluxo de glicerol, o AQP3 pode afetar a homeostase energética, o estado redox e processos de sinalização ligados à dinâmica de membrana, à proliferação e à função de barreira. A sua atividade é estudada em contextos como a diferenciação epitelial, a hidratação da pele e a migração de células imunes, nos quais foram relatadas alterações de expressão em condições inflamatórias e em múltiplos tipos de cancro. O AQP3 também é utilizado como marcador e como nó funcional em vias que conectam o transporte de solutos a respostas celulares ao stress e à adaptação ao microambiente.

Aquaporin 3/AQP3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de AQP3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Aquaporin 3/AQP3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus AQP3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição AQP3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Aquaporin 3/AQP3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus AQP3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Aquaporin 3/AQP3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Aquaporin 3/AQP3 em células tumorais com expressão de AQP3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.