Plásmido CRISPR de Activación (m) APLNR: sc-423839-ACT

El gen Aplnr de ratón codifica el receptor de apelina (APLNR), un GPCR de clase A que se une a péptidos de apelina y a ELABELA/Toddler para regular la señalización dependiente de proteínas G, incluida la modulación de AMPc, los flujos intracelulares de Ca2+, y las vías PI3K–AKT y MAPK/ERK. La actividad de APLNR influye en la función del endotelio y del músculo liso vascular, en las respuestas angiogénicas, en el desarrollo y el remodelado cardíacos, y en la homeostasis de líquidos mediante el control integrado de la migración, la proliferación y las propiedades de barrera. En los sistemas nervioso y metabólico, la señalización de APLNR se ha vinculado al acoplamiento neurovascular y al balance energético, situando a Aplnr como un nodo mecanístico que conecta programas de desarrollo y adaptación al estrés. La desregulación de la actividad de la vía APLNR se asocia con fenotipos cardiometabólicos, disfunción vascular y angiogénesis asociada a tumores, lo que la hace relevante para el mapeo de vías en modelos de enfermedad.

APLNR El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Aplnr sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

APLNR El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Aplnr en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Aplnr, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de APLNR. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Aplnr y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de APLNR en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía APLNR en células tumorales con expresión de Aplnr silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.