AP4A Hydrolase Plasmide KO CRISPR/Cas9 (r): sc-437371

Panoramica

L’idrolasi AP4A è un enzima del metabolismo dei nucleotidi che idrolizza la diadenosina tetrafosfato (Ap4A), una molecola di segnalazione pleiotropica di tipo “alarmone”, la cui abbondanza aumenta durante lo stress cellulare. Controllando il turnover di Ap4A, l’enzima contribuisce all’omeostasi dei nucleotidi e influenza processi a valle legati all’adattamento allo stress, all’equilibrio redox e alla regolazione di proteine leganti gli acidi nucleici. Alterazioni del metabolismo di Ap4A sono state associate a cambiamenti nella proliferazione, nella segnalazione infiammatoria e nella funzione neuronale, rendendo l’idrolasi AP4A rilevante per studi meccanicistici su fenotipi cardiometabolici, neurobiologici e immuno-correlati in modelli di ratto. La sua attività si interseca in modo ampio con vie che regolano il processamento di RNA/DNA e le risposte allo stress cellulare, in cui i secondi messaggeri dinucleotidici agiscono da modulatori.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO AP4A Hydrolase (r) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene in linee cellulari rat. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina AP4A Hydrolase.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di per lo studio della segnalazione di AP4A Hydrolase, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni critici per la funzione di AP4A Hydrolase
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal AP4A Hydrolase CRISPR/Cas9 KO Plasmid (r) e dal AP4A Hydrolase CRISPR/Cas9 KO Plasmid (r2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus . Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal AP4A Hydrolase Plasmide HDR (r) e il plasmide HDR AP4A Hydrolase (r2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.