AP-1μ2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-404512-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- AP-1μ2 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- AP-1μ2ダブルニカースプラスミド（h）およびAP-1μ2ダブルニカースプラスミド（h2）は、AP1M2を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
AP-1μ2 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-404512-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
AP-1μ2 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-404512-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
AP1M2 は、トランスゴルジネットワークおよびエンドソームにおけるクラスリン被覆小胞形成の中心的構成要素であるアダプタータンパク質複合体1（AP-1）の μ2 サブユニットをコードします。AP-1μ2 は、膜貫通タンパク質の細胞質側テールに存在するソーティングモチーフを認識することでカーゴ選別に関与し、受容体や酵素が分泌系およびエンドリソソーム系の輸送ネットワークを通って適切に輸送されるのを助けます。これらの機能を通じて、AP-1μ2 は膜タンパク質の恒常性、受容体のリサイクリング、ならびにシグナル出力やオルガネラ組成を形作る極性輸送過程を支えます。アダプター複合体によるソーティングの破綻は、神経発生、免疫シグナル、がん細胞生物学の研究全般に広く関係しており、小胞輸送の変化が増殖因子受容体の量や下流経路の活性化に影響し得ます。
AP-1μ2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における AP1M2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、AP1M2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、AP1M2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、AP1M2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。