Plasmide Double Nickase (h) Annexin-2/ANXA2: sc-400296-NIC

ANXA2 code l'annexine A2, une protéine de liaison aux phospholipides dépendante du Ca²⁺, associée à la membrane plasmique et à l'actine corticale afin de coordonner le trafic membranaire, le remodelage du cytosquelette et la motilité cellulaire. L'annexine A2 fonctionne en complexes avec S100A10 pour favoriser la génération de plasmine et la protéolyse péricellulaire, ce qui la relie au renouvellement de la matrice extracellulaire et à la signalisation associée aux plaies. Elle contribue à l'endocytose/exocytose, à l'organisation des radeaux lipidiques et à la régulation des voies fibrinolytiques et inflammatoires. Une expression ou une localisation dérégulée d'ANXA2 a été rapportée dans de nombreux types de tumeurs ainsi que dans des affections vasculaires/inflammatoires, ce qui en fait un nœud pertinent pour étudier l'invasion, les réponses angiogéniques et la dynamique membranaire adaptative au stress.

Annexin-2/ANXA2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ANXA2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ANXA2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ANXA2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ANXA2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.