Plásmido CRISPR de Activación (h) Angiopoietin 2/Ang-2/ANGPT2: sc-400477-ACT

El gen humano **ANGPT2** codifica la angiopoyetina-2 (Ang-2), un factor de crecimiento vascular secretado que se une al receptor tirosina cinasa endotelial **TEK/TIE2** y modula la señalización angiopoyetina–TIE. Ang-2 actúa como un regulador dependiente del contexto de la remodelación vascular, la activación endotelial y la desestabilización de los vasos, integrando señales de la hipoxia y de citocinas inflamatorias para influir en la integridad de la barrera y el tráfico de leucocitos. Mediante la interacción cruzada con la angiogénesis impulsada por VEGF y con vías inflamatorias, la expresión de **ANGPT2** ayuda a determinar la supervivencia y migración de las células endoteliales, así como sus interacciones con los pericitos. La desregulación de **ANGPT2** se asocia con la angiogénesis patológica y la inflamación vascular observadas en microambientes tumorales, retinopatías y complicaciones vasculares cardiometabólicas, lo que la convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos de la disfunción endotelial.

Angiopoietin 2/Ang-2/ANGPT2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ANGPT2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Angiopoietin 2/Ang-2/ANGPT2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ANGPT2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ANGPT2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Angiopoietin 2/Ang-2/ANGPT2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ANGPT2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Angiopoietin 2/Ang-2/ANGPT2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Angiopoietin 2/Ang-2/ANGPT2 en células tumorales con expresión de ANGPT2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.