amphiregulin Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-419185-ACT

O gene **Areg** de camundongo codifica a **anfiregulina**, um ligante da família do fator de crescimento epidérmico (EGF) que sinaliza principalmente por meio dos receptores **EGFR/ERBB** para ativar as vias **MAPK/ERK**, **PI3K–AKT** e **JAK/STAT**. A anfiregulina regula a proliferação e a diferenciação epiteliais, o reparo tecidual e a comunicação entre estroma e sistema imune, com expressão induzível em vários tipos celulares, incluindo células epiteliais e subpopulações ativadas de células mieloides e de linfócitos T. A sinalização anfiregulina–EGFR aberrante tem sido associada a inflamação desregulada, remodelamento fibrótico e programas do microambiente associado a tumores, tornando **Areg** um alvo útil para estudos de vias e fenótipos. Em modelos murinos, a dinâmica de expressão de **Areg** é frequentemente investigada para relacionar a intensidade da sinalização por EGFR com a função de barreira, respostas a feridas e remodelamento mediado pelo sistema imune.

amphiregulin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Areg sem alterar a sequência de ADN subjacente.

amphiregulin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Areg em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Areg, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de amphiregulin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Areg nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de amphiregulin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via amphiregulin em células tumorais com expressão de Areg silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.