Alox12e Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419087

Panoramica

Alox12e codifica l’arachidonato 12-lipossigenasi di tipo 12R, una diossigenasi a ferro non-eme che catalizza l’ossigenazione degli acidi grassi polinsaturi per generare mediatori lipidici bioattivi. Nell’epidermide del topo, Alox12e opera all’interno della via delle lipossigenasi e coopera con enzimi correlati nell’elaborazione ossidativa dei lipidi, che sostiene la differenziazione dei cheratinociti e la formazione della barriera dello strato corneo. Attraverso la regolazione dei prodotti dell’ossidazione lipidica e della segnalazione a valle, Alox12e contribuisce all’omeostasi della barriera, alle risposte infiammatorie e alla segnalazione da stress nella cute. L’alterazione di questo asse è rilevante per studi su difetti di barriera di tipo ittiosiforme, infiammazione associata a dermatite e fenotipi più ampi del metabolismo lipidico nella biologia epiteliale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Alox12e (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Alox12e in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Alox12e insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Alox12e a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Alox12e.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Alox12e per lo studio della segnalazione di Alox12e, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Alox12e critici per la funzione di Alox12e
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Alox12e per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Alox12e CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Alox12e CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Alox12e. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Alox12e Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Alox12e (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Alox12e per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Alox12e definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.