AKAP 79 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402647

Visão geral

AKAP5 codifica a AKAP 79, uma proteína de ancoragem de A-quinase associada à membrana que organiza complexos de sinalização multiproteicos ao ancorar a PKA, juntamente com fosfatases como a calcineurina e a PP2B, em microdomínios subcelulares definidos. Ao atuar como plataforma para quinases, fosfatases e receptores, a AKAP 79 modula a amplitude e a duração dos sinais em vias que controlam a plasticidade sináptica, o tráfego de receptores e a fosforilação dependente de atividade, incluindo processos regulados por cálcio e por cAMP. Em neurônios e tecidos excitáveis, essa regulação espacial influencia a modulação de canais iônicos e respostas transcricionais a jusante. A desregulação da sinalização mediada pela AKAP 79 tem sido associada a alterações na excitabilidade neuronal e na função de redes neurais, tornando a AKAP5 um nó útil para estudar mecanismos relevantes para a biologia de doenças neurológicas e para a sinalização responsiva ao estresse.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO AKAP 79 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene AKAP5 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do AKAP5, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do AKAP5 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína AKAP 79.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de AKAP5 para a investigação da sinalização de AKAP 79, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) AKAP5 críticos para a função AKAP 79
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos AKAP5 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo AKAP 79 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo AKAP 79 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus AKAP5. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo AKAP 79 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR AKAP 79 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia AKAP5 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo AKAP5 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.