Plasmide Double Nickase (h) AIP5: sc-403772-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) AIP5 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide AIP5 Double Nickase (h) et le plasmide AIP5 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant WWP1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: AIP5 Antibody (F-3): sc-390897
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) AIP5 | sc-403772-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) AIP5 | sc-403772-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
WWP1 code l’E3 ubiquitine‑ligase humaine AIP5, une enzyme à domaine HECT qui ubiquitine divers substrats afin de réguler la stabilité des protéines, leur trafic et l’amplitude des signaux. Grâce à la reconnaissance des motifs PPxY via ses domaines WW, AIP5 contribue à ajuster des voies contrôlant la croissance cellulaire, la polarité et les réponses au stress, notamment en modulant la signalisation au voisinage des récepteurs et le renouvellement de protéines régulatrices. Une activité dérégulée de WWP1/AIP5 a été associée à une homéostasie de l’ubiquitine altérée et à des programmes de signalisation aberrants impliqués dans la transformation oncogénique et certains phénotypes du développement. Par conséquent, WWP1 est fréquemment étudié pour comprendre comment la protéostasie médiée par l’ubiquitine s’articule avec la prolifération, la migration et le remodelage des voies de signalisation dans les cellules humaines.
AIP5 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus WWP1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de WWP1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de WWP1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de WWP1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.