Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
Plasmide Double Nickase (h) AGA: sc-409587-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) AGA correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide AGA Double Nickase (h) et le plasmide AGA Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant AGA. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: AGA Antibody (H-8): sc-514075
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) AGA | sc-409587-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) AGA | sc-409587-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
L’AGA humain code l’aspartylglucosaminidase, une hydrolase lysosomale qui clive la liaison N‑glycosylée glycoasparagine lors du catabolisme des glycoprotéines, contribuant ainsi au renouvellement des glycoacides aminés dérivés des glycoprotéines. L’enzyme agit au sein du réseau de dégradation endo‑lysosomal et participe à la protéostasie cellulaire en permettant un traitement efficace des glycoconjugués complexes. Une altération de l’activité d’AGA est associée à une clairance lysosomale déficiente et à l’accumulation de substrats non dégradés, caractéristique de la biologie des maladies de surcharge lysosomale. En conséquence, AGA est fréquemment étudiée dans le cadre du métabolisme dépendant des lysosomes, des réponses au stress lié à une charge protéotoxique et des relations génotype‑phénotype dans des modèles de maladies métaboliques héréditaires.
AGA Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus AGA dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de AGA. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de AGA. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de AGA.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.