AFP/Alpha fetoprotein Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400355

Descripción general

AFP (alfafetoproteína) codifica una glucoproteína oncofetal secretada que se expresa intensamente durante el desarrollo fetal y queda en gran medida silenciada tras el nacimiento, donde contribuye a la regulación de programas de crecimiento y diferenciación. En tejidos adultos, la reexpresión de AFP se asocia con frecuencia a estados alterados del linaje hepático y a la remodelación de la señalización extracelular e inmunitaria en el microambiente tumoral. La expresión de AFP se utiliza como característica molecular en estudios de carcinoma hepatocelular y biología de tumores de células germinales, y se evalúa comúnmente junto con vías vinculadas a la diferenciación de hepatocitos, la proliferación y las respuestas al estrés. Como proteína circulante, AFP también sirve como una lectura accesible de la regulación transcripcional y de la dinámica de la vía secretora en modelos celulares humanos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO AFP/Alpha fetoprotein (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen AFP en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del AFP junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de AFP tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína AFP/Alpha fetoprotein.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en AFP para la investigación de la señalización de AFP/Alpha fetoprotein, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de AFP críticos para la función de AFP/Alpha fetoprotein
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de AFP para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido AFP/Alpha fetoprotein CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido AFP/Alpha fetoprotein CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus AFP. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR AFP/Alpha fetoprotein (h) y el plásmido HDR AFP/Alpha fetoprotein (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología AFP para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana AFP definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.