AdoMetDC Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-404514-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- AdoMetDCO plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase AdoMetDC (h) e o Plasmídeo Double Nickase AdoMetDC (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para AMD1. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:AdoMetDC Anticorpo (E-6): sc-166970
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
AdoMetDC Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-404514-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
AdoMetDC Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-404514-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
AMD1 codifica a S-adenosilmetionina descarboxilase humana (AdoMetDC), uma enzima limitante da velocidade na biossíntese de poliaminas que gera S-adenosilmetionina descarboxilada, utilizada na produção de espermidina e espermina. Por meio da regulação dos estoques intracelulares de poliaminas, a AdoMetDC influencia a tradução, a organização da cromatina, a replicação do DNA e a progressão do ciclo celular, conectando a atividade de AMD1 ao controle do crescimento e às respostas ao estresse celular. A desregulação do metabolismo de poliaminas e a expressão ou atividade alteradas de AMD1 têm sido associadas a fenótipos proliferativos e à reprogramação metabólica observados em múltiplos contextos de doença, sustentando seu uso como um nó mecanístico para a investigação de vias. Como guardião metabólico, AMD1 é comumente estudado em associação com a ornitina descarboxilase e com vias de catabolismo/transporte de poliaminas para mapear o feedback homeostático e os efeitos a jusante na expressão gênica.
AdoMetDC O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus AMD1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de AMD1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função AMD1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com AMD1 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.