Adenosine A2A-R Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400807-ACT

ADORA2A codifica o receptor de adenosina A2A (A2A-R), um receptor acoplado à proteína G que sinaliza predominantemente via Gs para elevar o cAMP e ativar programas transcricionais dependentes de PKA/CREB. O A2A-R integra sinais extracelulares de adenosina gerados durante estresse metabólico ou inflamação, moldando respostas como a produção de citocinas, a ativação de leucócitos e a sinalização neuromodulatória. No sistema nervoso central, o ADORA2A é enriquecido em circuitos estriatais, onde interage funcionalmente com a sinalização dopaminérgica para regular a plasticidade sináptica e o controle motor. A desregulação da sinalização de ADORA2A tem sido implicada em neuroinflamação e processos neurodegenerativos, bem como na imunossupressão associada a tumores, sustentando sua utilidade para a dissecação de vias em modelos de imunologia e neurociência.

Adenosine A2A-R O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ADORA2A sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Adenosine A2A-R O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ADORA2A em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ADORA2A, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Adenosine A2A-R. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ADORA2A nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Adenosine A2A-R no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Adenosine A2A-R em células tumorais com expressão de ADORA2A silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.