βA4-crystallin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419824

Descripción general

Cryba4 codifica la βA4-cristalina, una cristalina estructural importante del cristalino ocular del ratón que contribuye a las propiedades refractivas y a la transparencia del cristalino a largo plazo. Como miembro de la superfamilia de las β/γ-cristalinas, la βA4-cristalina participa en la diferenciación de las células de las fibras del cristalino y en la formación de ensamblajes proteicos estrechamente empaquetados y altamente ordenados que mantienen la homogeneidad óptica. Su estabilidad y sus interacciones dentro de las redes de cristalinas influyen en procesos de homeostasis proteica como el plegamiento asistido por chaperonas y la protección frente a la agregación bajo estrés oxidativo y asociado al envejecimiento. La alteración o desregulación de la composición de las cristalinas se vincula con fenotipos de opacificación del cristalino, lo que respalda a Cryba4 como un locus relevante para mecanismos relacionados con cataratas y estudios del desarrollo ocular.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO βA4-crystallin (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Cryba4 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Cryba4 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Cryba4 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína βA4-crystallin.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Cryba4 para la investigación de la señalización de βA4-crystallin, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Cryba4 críticos para la función de βA4-crystallin
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Cryba4 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido βA4-crystallin CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido βA4-crystallin CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Cryba4. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR βA4-crystallin (m) y el plásmido HDR βA4-crystallin (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Cryba4 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Cryba4 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.