β1-SyntrophinCRISPR激活质粒(h): sc-405993-ACT

SNTB1 编码 β1-合成营养蛋白（β1-syntrophin），它是肌营养不良蛋白相关蛋白复合体（dystrophin-associated protein complex, DAPC）中的一种细胞骨架适配蛋白，负责在质膜处对信号蛋白进行支架化组装。β1-合成营养蛋白通过其 PDZ 结构域组织微区，将膜受体和离子通道与富含肌动蛋白的结构耦联，从而影响兴奋性与非兴奋性组织中的细胞黏附、机械力转导以及信号转导等过程。依赖 SNTB1 的复合体可调控与一氧化氮信号及通道定位相关的通路，促进膜稳定性并实现受调控的细胞反应。肌营养不良蛋白复合体组分及其相关支架网络的失调已被认为与神经肌肉和心肌病样表型有关，因此 SNTB1 是研究疾病相关膜信号与细胞骨架组织的重要靶点。

β1-Syntrophin CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性SNTB1的表达。

β1-Syntrophin CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的SNTB1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于SNTB1转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性β1-Syntrophin表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的SNTB1位点，并能够研究内源性位点上依赖于β1-Syntrophin的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在SNTB1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟β1-Syntrophin通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。