Plásmido CRISPR de Activación (h) αPAK: sc-400857-ACT

PAK1 codifica αPAK (quinasa 1 activada por p21), una quinasa de serina/treonina que se activa aguas abajo de las GTPasas de la familia Rho RAC1 y CDC42. αPAK integra señales de receptores de factores de crecimiento e integrinas para regular la remodelación del citoesqueleto de actina, la renovación de las adhesiones focales y la motilidad celular, además de modular las salidas de las vías MAPK/ERK y PI3K-AKT. Mediante la fosforilación de sustratos implicados en la dinámica del citoesqueleto y en la regulación transcripcional, PAK1 influye en la proliferación, la supervivencia y las respuestas al estrés en múltiples tipos celulares. La desregulación de la señalización de PAK1 se ha vinculado a programas aberrantes de migración y proliferación, y se estudia con frecuencia en el contexto de la biología del cáncer, la neurobiología y las redes de señalización inflamatoria.

αPAK El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PAK1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

αPAK El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PAK1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PAK1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de αPAK. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PAK1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de αPAK en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía αPAK en células tumorales con expresión de PAK1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.