α-actinin-4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2): sc-400548-KO-2

Übersicht

ACTN4 kodiert α-Actinin-4, ein calciumunempfindliches, aktinfilamentvernetzendes Protein, das an fokalen Adhäsionen, Stressfasern und Zell-Zell-Kontakten lokalisiert und dort die Zytoskelettarchitektur sowie die mechanische Signalübertragung reguliert. Durch die Organisation von F‑Aktin-Netzwerken und deren Kopplung an integrinassoziierte Komplexe trägt α-Actinin-4 zu Zelladhäsion, Ausbreitung, Migration und Veränderungen der Zellsteifigkeit bei, die Signalwege wie die Rho-GTPase-Signalgebung und die Mechanotransduktion beeinflussen. Zusätzlich zu seinen zytoplasmatischen Funktionen wird α-Actinin-4 auch mit nukleären Aufgaben in Verbindung gebracht, darunter die Modulation von Transkriptionsprogrammen über Protein-Protein-Interaktionen. Eine fehlregulierte ACTN4-Expression oder Mutationen wurden mit einer Dysfunktion von Podozyten in der Niere (einschließlich fokal-segmentaler Glomerulosklerose) sowie mit invasiven Phänotypen in mehreren Tumorarten assoziiert, was seine Relevanz für Studien zur Kontrolle des Zytoskeletts und krankheitsassoziiertem Zellverhalten unterstreicht.

Das α-actinin-4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des ACTN4-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des ACTN4-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von ACTN4 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die α-actinin-4-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von ACTN4-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der α-actinin-4-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf ACTN4-Exone abzielen, die für die α-actinin-4-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere ACTN4-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom α-actinin-4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom α-actinin-4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des ACTN4-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das α-actinin-4 HDR-Plasmid (h) und α-actinin-4 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von ACTN4-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten ACTN4-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.