α-actinin-4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400548-ACT

ACTN4 codifica a α-actinina-4, uma proteína de ligação à actina sensível ao cálcio que faz a ligação cruzada da actina filamentosa e ancora redes do citoesqueleto a complexos de adesão. Ela se localiza em fibras de estresse, adesões focais e estruturas dinâmicas ricas em actina para regular a forma celular, as forças de tração e processos impulsionados pelo citoesqueleto, incluindo migração e citocinese. Por meio de suas funções na remodelação da actina e na sinalização de adesão, a α-actinina-4 influencia vias que controlam a mecanotransdução e a motilidade celular. A expressão ou a função desregulada de ACTN4 tem sido associada a alterações na invasividade celular e à disfunção de podócitos renais, apoiando sua relevância em estudos de mecanismos de doenças do citoesqueleto.

α-actinin-4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ACTN4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

α-actinin-4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ACTN4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ACTN4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de α-actinin-4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ACTN4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de α-actinin-4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via α-actinin-4 em células tumorais com expressão de ACTN4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.