α-actinin-3 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-401486-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- α-actinin-3O plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase α-actinin-3 (h) e o Plasmídeo Double Nickase α-actinin-3 (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para ACTN3. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:α-actinin Anticorpo (H-2): sc-17829
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
α-actinin-3 Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-401486-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
α-actinin-3 Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-401486-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ACTN3 codifica a α-actinina-3, uma proteína de ligação à actina do disco Z, enriquecida em fibras musculares esqueléticas de contração rápida, onde faz ligações cruzadas entre filamentos de actina e ajuda a organizar o citoesqueleto sarcomérico. Ao estabilizar o aparato contrátil e ao se acoplar a programas de mecanotransdução e de manuseio de cálcio, a α-actinina-3 influencia a potência muscular, a repartição metabólica e as respostas adaptativas à carga. Variações naturais de perda de função em ACTN3 são amplamente estudadas no contexto de características de desempenho muscular e composição de tipos de fibra, e redes alteradas de α-actinina são relevantes para investigações da integridade miofibrilar em fenótipos neuromusculares e miopáticos. Como andaime estrutural, a α-actinina-3 também oferece um ponto de entrada para investigar vias de sinalização associadas à linha Z e interações proteína–proteína que regulam a remodelação muscular.
α-actinin-3 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus ACTN3 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de ACTN3. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função ACTN3. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com ACTN3 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.