H2-Q1 Ativadores

Os activadores H2-Q1 comuns incluem, entre outros, a forskolina CAS 66575-29-9, o IBMX CAS 28822-58-4, a (-)-epinefrina CAS 51-43-4, a PGE1 (prostaglandina E1) CAS 745-65-3 e o rolipram CAS 61413-54-5.

A identificação destes activadores envolveria normalmente um processo que começa com um ensaio de rastreio de elevado rendimento (HTS). Este ensaio seria concebido para detetar e medir a ativação da H2-Q1, avaliando as consequências biológicas ou bioquímicas da sua atividade. Esse ensaio pode utilizar um mecanismo repórter que produz um sinal fluorescente ou luminescente em resposta à atividade do H2-Q1, que pode ser a expressão de um gene a jusante, a presença de uma determinada interação proteína-proteína ou uma modificação pós-tradução específica que ocorre em resultado da atividade do H2-Q1. Os compostos de uma biblioteca química grande e diversificada seriam testados no ensaio HTS e os que provocassem um aumento significativo do sinal seriam marcados como potenciais activadores da H2-Q1. Estes compostos seriam então submetidos a ensaios de validação secundários para confirmar a sua atividade e começar a compreender o seu mecanismo de ação.

Uma vez identificados os primeiros resultados do HTS, estes potenciais activadores H2-Q1 seriam submetidos a um rigoroso processo de validação. Os ensaios secundários que podem ser utilizados incluem estudos de ligação direta para confirmar a interação entre os compostos e a proteína H2-Q1 ou os componentes da via associados. Técnicas como a ressonância plasmónica de superfície (SPR) ou a calorimetria de titulação isotérmica (ITC) podem ser utilizadas para quantificar esta interação, medindo a afinidade e a cinética da ligação. No entanto, a confirmação da ligação direta é apenas um aspeto do processo de validação. O efeito destes compostos na função do H2-Q1 também seria avaliado através de vários ensaios funcionais. Estes poderiam incluir ensaios in vitro que medem a atividade catalítica da proteína H2-Q1, ou talvez ensaios celulares que observam a resposta fisiológica à ativação da H2-Q1. Poderiam também ser realizados estudos estruturais pormenorizados para revelar a forma como estes activadores interagem com a proteína H2-Q1.