gp91phox Ativadores

Os activadores comuns do gp91phox incluem, entre outros, o PMA CAS 16561-29-8, o cloreto de difenileneiodónio CAS 4673-26-1, o ácido araquidónico (20:4, n-6) CAS 506-32-1, o A23187 CAS 52665-69-7 e a forskolina CAS 66575-29-9.

A descoberta de tais activadores começaria com o desenvolvimento de uma estratégia de rastreio de elevado rendimento (HTS). Esta estratégia utilizaria uma biblioteca de diversas entidades químicas, que seriam sistematicamente testadas quanto à sua capacidade de aumentar a atividade da gp91phox. O ensaio HTS basear-se-ia provavelmente na deteção de espécies reactivas de oxigénio ou de produtos relacionados que resultam da ação enzimática do complexo NADPH oxidase. Por exemplo, pode ser utilizada uma sonda quimioluminescente ou fluorescente que responda à presença destas espécies reactivas. Esta sonda produziria um sinal detetável após reação com os produtos da atividade da enzima gp91phox, permitindo assim a rápida identificação de compostos que causam um aumento da intensidade do sinal acima de um limiar predefinido, indicando potenciais propriedades activadoras.

Subsequentemente, os compostos assinalados como potenciais activadores no processo HTS seriam validados através de ensaios secundários. Estes ensaios foram concebidos para serem mais específicos e confirmarem que o aumento da atividade enzimática se deve diretamente à ação do composto na gp91phox. Para tal, seria utilizada uma bateria de ensaios bioquímicos para excluir efeitos inespecíficos e para determinar a interação direta entre o composto e a proteína. Uma vez confirmada, a interação entre a proteína gp91phox e os compostos activadores seria caracterizada em pormenor. Poderiam ser efectuadas análises estruturais, como a cristalografia de raios X ou a microscopia crioelectrónica, para revelar a natureza exacta da ligação e compreender o mecanismo pelo qual estes activadores aumentam a atividade da proteína. Estes conhecimentos estruturais seriam complementados por ensaios cinéticos que medem as alterações na taxa de atividade da proteína gp91phox na presença dos activadores. Além disso, a modelização e as simulações in silico desempenhariam um papel crucial na previsão da forma como estes activadores interagem com a gp91phox a nível molecular, conduzindo potencialmente à conceção racional de compostos mais potentes.