ZnT-7 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405830

Descripción general

SLC30A7 codifica el transportador de zinc ZnT-7, un miembro de la familia SLC30 (ZnT) que media el eflujo de zinc desde el citosol hacia compartimentos intracelulares, contribuyendo a la homeostasis del zinc y a la disponibilidad compartimentalizada de iones metálicos. Al regular la distribución del zinc dentro de la vía secretora y del sistema endomembranoso, ZnT-7 influye en la actividad de las metaloproteínas, el equilibrio redox y los procesos de señalización dependientes de zinc que modulan el metabolismo celular y las respuestas al estrés. La alteración del transporte de zinc se ha asociado con disfunciones en la biología de los gránulos de insulina, la señalización inflamatoria y el estrés oxidativo, lo que hace que SLC30A7 sea de interés en estudios sobre disfunción metabólica y mecanismos complejos de enfermedades relacionadas. Como regulador de la homeostasis del zinc, ZnT-7 también es relevante para investigaciones sobre la función de los orgánulos y la maduración de enzimas dependientes de metales en células humanas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO ZnT-7 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen SLC30A7 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del SLC30A7 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de SLC30A7 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ZnT-7.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en SLC30A7 para la investigación de la señalización de ZnT-7, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de SLC30A7 críticos para la función de ZnT-7
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de SLC30A7 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido ZnT-7 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido ZnT-7 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus SLC30A7. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ZnT-7 (h) y el plásmido HDR ZnT-7 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología SLC30A7 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana SLC30A7 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.