ZNF526 Plasmide Double Nickase (m): sc-431684-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ZNF526 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ZNF526 Double Nickase Plasmid (m) e il ZNF526 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Zfp526. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ZNF526 Plasmide Double Nickase (m) | sc-431684-NIC | 20 µg | $410.00 |
Zfp526 codifica la proteina a dita di zinco murina ZNF526, un presunto fattore nucleare legante il DNA implicato nella regolazione trascrizionale attraverso interazioni con la cromatina dipendenti da sequenze specifiche. In quanto proteina multi–zinc finger di tipo C2H2, ci si aspetta che ZNF526 partecipi a reti di regolazione genica che influenzano il mantenimento dello stato cellulare, la specificazione di linea e programmi trascrizionali dipendenti dal contesto. La modulazione del controllo trascrizionale mediato da zinc finger si interseca con vie che governano la regolazione epigenetica e la segnalazione dello sviluppo, rendendo Zfp526 un bersaglio utile per studiare la robustezza dell’espressione genica e l’architettura regolatoria. La disregolazione dei fattori di trascrizione a dita di zinco è spesso associata ad alterazioni della differenziazione e a fenotipi proliferativi in modelli rilevanti per la malattia, a sostegno di indagini meccanicistiche su Zfp526 nell’omeostasi cellulare.
ZNF526 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Zfp526 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Zfp526. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Zfp526. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Zfp526 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.