ZNF526 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-431684

Übersicht

Zfp526 kodiert das murine Zinkfingerprotein ZNF526, einen vermutlich im Zellkern lokalisierten DNA-bindenden Faktor, der über C2H2-Zinkfinger-vermittelte Wechselwirkungen mit regulatorischen Elementen an der Transkriptionsregulation beteiligt ist. Wie bei vielen KRAB-assoziierten Zinkfingerproteinen wird erwartet, dass ZNF526 an chromatinabhängiger Genstilllegung sowie an der Modulation linienspezifischer Transkriptionsprogramme mitwirkt, die Zellzustand und Differenzierung beeinflussen. Eine veränderte Expression oder Dysregulation von Zinkfinger-Transkriptionsfaktoren kann epigenetische Kontrollnetzwerke und nachgeschaltete Signalwege stören und bietet damit einen Rahmen, um Genregulationsmechanismen zu untersuchen, die für Entwicklungsphänotypen und krankheitsassoziierte Transkriptionsungleichgewichte relevant sind. Die funktionelle Untersuchung von Zfp526 unterstützt Analysen dazu, wie Schnittstellen zwischen Transkriptionsfaktoren und Chromatin die Genexpression und die zelluläre Homöostase in Mausmodellsystemen prägen.

Das ZNF526 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Zfp526-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Zfp526-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Zfp526 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ZNF526-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Zfp526-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ZNF526-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Zfp526-Exone abzielen, die für die ZNF526-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Zfp526-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ZNF526 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom ZNF526 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Zfp526-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ZNF526 HDR-Plasmid (m) und ZNF526 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Zfp526-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Zfp526-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.