ZBTB1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-411630-ACT

ZBTB1 (Zinkfinger- und BTB-Domäne enthaltend 1) kodiert einen transkriptionellen Regulator, der durch BTB/POZ-vermittelte Proteininteraktionen und C2H2-Zinkfinger-abhängige DNA-Bindung die Gestaltung von abstammungs- und kontextspezifischen Genexpressionsprogrammen steuert. In der Hämatopoese- und Immunzellbiologie ist ZBTB1 an der Kontrolle von Differenzierung, Proliferation und Genomstabilität beteiligt und verknüpft so die transkriptionelle Regulation mit der DNA-Schadensantwort und der Aufrechterhaltung von Chromatinzuständen. Eine veränderte ZBTB1-Aktivität kann regulatorische Netzwerke stören, die die lymphoide Entwicklung und Stressantworten steuern, und ist damit relevant für Studien zu immundefizienzähnlichen Phänotypen, hämatologischer Dysregulation und onkogener transkriptioneller Signalverschaltung. Als nukleärer Faktor wird ZBTB1 häufig in der Pathway-Kartierung von transkriptioneller Repression/Aktivierung, Chromatinorganisation und checkpoint-assoziierten Prozessen untersucht.

ZBTB1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ZBTB1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ZBTB1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ZBTB1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ZBTB1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ZBTB1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ZBTB1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ZBTB1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ZBTB1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ZBTB1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.