Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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ZAG Double Nickase Plasmid (h): sc-401706-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ZAG Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ZAG Double-Nickase-Plasmid (h) und ZAG Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf AZGP1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: ZAG: sc-13585
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ZAG Double Nickase Plasmid (h) | sc-401706-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ZAG Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401706-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
AZGP1 kodiert das Zink-α2-Glykoprotein (ZAG), ein sezerniertes, MHC-Klasse-I-ähnliches Glykoprotein, das an der Mobilisierung von Lipiden und der systemischen Energiehomöostase beteiligt ist. ZAG wird von Epithelgeweben sowie adiposeassoziierten Geweben gebildet und mit der Regulation des Adipozytenstoffwechsels, extrazellulärer Signalübertragung und inflammatorischem Crosstalk innerhalb des Gewebemikromilieus in Verbindung gebracht. Eine veränderte AZGP1-Expression wurde bei zahlreichen Krebsarten und metabolischen Erkrankungen beschrieben, wobei sie mit Veränderungen des Differenzierungszustands, der Nährstoffverwertung und kataboler Programme korreliert. Diese Zusammenhänge machen AZGP1/ZAG zu einem nützlichen Marker und mechanistischen Knotenpunkt für die Untersuchung von metabolischem Remodeling, Epithelbiologie und Tumor–Stroma-Interaktionen.
ZAG Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des AZGP1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von AZGP1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die AZGP1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit AZGP1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.