Plasmide CRISPR/Cas9 KO Y+LAT1 (h): sc-404403

Présentation

SLC7A7 code pour Y+LAT1, une sous-unité de chaîne légère du système hétéromérique de transport des acides aminés y+L, qui s’associe à SLC3A2 (4F2hc/CD98) pour assurer l’échange d’acides aminés cationiques tels que la lysine et l’arginine avec des acides aminés neutres à travers la membrane plasmique. Cette activité de transport contribue à l’équilibre azoté cellulaire et relie la disponibilité en acides aminés à l’homéostasie métabolique et aux processus de détection des nutriments. La fonction de Y+LAT1 est particulièrement pertinente dans les contextes épithéliaux et immunitaires, où les flux d’acides aminés influencent la croissance et les voies de signalisation. Une altération pathogène de SLC7A7 est associée à l’intolérance protéique lysinurique, reliant des défauts de transport dépendants de Y+LAT1 à un déséquilibre systémique des acides aminés et à des complications inflammatoires en aval.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Y+LAT1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SLC7A7 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SLC7A7, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SLC7A7 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Y+LAT1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SLC7A7 pour l'étude de la signalisation de Y+LAT1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SLC7A7 essentiels à la fonction de Y+LAT1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SLC7A7 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Y+LAT1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Y+LAT1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SLC7A7. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Y+LAT1 plasmide HDR (h) et le Y+LAT1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SLC7A7 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SLC7A7 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.