Plásmido CRISPR de Activación (h) XBP1: sc-400131-ACT

XBP1 (proteína de unión a la X-box 1) es un factor de transcripción bZIP que actúa como efector central de la respuesta a proteínas mal plegadas (UPR) aguas abajo de la señalización de estrés del retículo endoplásmico (RE). Tras el empalme mediado por IRE1, XBP1 activo programa redes transcripcionales que amplían la capacidad de plegamiento del RE, potencian la degradación asociada al RE y promueven la biosíntesis de lípidos y la homeostasis de la vía secretora. La actividad de XBP1 influye en la diferenciación y la función de tipos celulares secretores y modula programas de células inmunitarias, incluido el desarrollo de células plasmáticas y las salidas de señalización inflamatoria. La desregulación de la señalización XBP1/UPR se ha implicado en la adaptación de células cancerosas al estrés proteotóxico, en enfermedades metabólicas y en la neurodegeneración, lo que lo convierte en un nodo ampliamente utilizado para estudios mecanísticos de resiliencia al estrés y proteostasis.

XBP1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de XBP1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

XBP1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus XBP1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional XBP1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de XBP1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo XBP1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de XBP1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía XBP1 en células tumorales con expresión de XBP1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.