Plasmide CRISPR d'Activation (h) Xanthine Oxidase: sc-401185-ACT

XDH code la xanthine oxydoréductase, qui peut fonctionner comme xanthine oxydase pour catalyser les étapes terminales du catabolisme des purines, en convertissant l’hypoxanthine en xanthine puis la xanthine en acide urique. Cette enzyme constitue une source majeure d’espèces réactives de l’oxygène (ROS) lors des réactions de transfert d’électrons, reliant le métabolisme des purines à l’homéostasie redox cellulaire et à la signalisation du stress oxydatif. L’activité de XDH interfère avec des voies inflammatoires et sensibles à l’hypoxie, et contribue à des modifications de l’endothélium et du microenvironnement tissulaire en situation de stress métabolique. Une activité de la xanthine oxydase dérégulée et un équilibre urate/ROS altéré sont fréquemment étudiés dans des contextes tels que la biologie associée à l’hyperuricémie, les dysfonctionnements cardiométaboliques et les modèles d’ischémie-reperfusion.

Xanthine Oxidase Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de XDH sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Xanthine Oxidase Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus XDH dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription XDH, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Xanthine Oxidase. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus XDH natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Xanthine Oxidase au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Xanthine Oxidase dans les cellules tumorales présentant une expression de XDH silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.