Plasmide CRISPR/Cas9 KO WSTF (h): sc-404237

Présentation

BAZ1B code le facteur de transcription du syndrome de Williams (WSTF), une protéine régulatrice associée à la chromatine qui constitue une sous-unité centrale des complexes de remodelage WICH et B-WICH. WSTF coordonne le remodelage des nucléosomes avec la réplication et la réparation de l’ADN, contribuant à la stabilité du génome via la régulation des réponses au stress réplicatif et la reprise des fourches de réplication bloquées. Elle possède également une activité tyrosine kinase atypique, impliquée dans une signalisation dépendante de la phosphorylation au niveau de la chromatine, reliant le contrôle transcriptionnel aux voies sensibles aux dommages de l’ADN. Des altérations de la dose de BAZ1B et une dérégulation des programmes de chromatine médiés par WSTF ont été associées à des phénotypes neurodéveloppementaux ainsi qu’à des défauts transcriptionnels et de réparation pertinents pour le cancer, ce qui en fait une cible d’étude importante en régulation épigénétique et en biologie des maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO WSTF (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène BAZ1B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du BAZ1B, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert BAZ1B à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine WSTF.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en BAZ1B pour l'étude de la signalisation de WSTF, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de BAZ1B essentiels à la fonction de WSTF
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de BAZ1B pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le WSTF plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le WSTF plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus BAZ1B. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le WSTF plasmide HDR (h) et le WSTF (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie BAZ1B pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles BAZ1B définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.