WISP-2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402996-ACT

WISP2 (WISP-2/CCN5) ist ein sezerniertes, matricelluläres Protein der CCN-Familie, das Signale aus der extrazellulären Matrix mit Wachstumsfaktor-Signalwegen integriert und dadurch Zelladhäsion, Migration und Proliferation beeinflusst. Es wird nachgeschaltet von Wnt/β-Catenin reguliert und überschneidet sich mit TGF-β-, IGF- und integrinvermittelten Signalwegen, die den Zytoskelettumbau sowie die stromal-epitheliale Kommunikation steuern. In menschlichen Geweben wurde die WISP-2-Expression mit Programmen des Gewebeumbaus und fibroproliferativen Reaktionen in Verbindung gebracht; ihre Fehlregulation wird in Kontexten wie der Krebsbiologie, metabolischer Entzündung und vaskulärer Pathologie untersucht. Diese Eigenschaften machen WISP-2 zu einem nützlichen Knotenpunkt, um ECM-abhängige transkriptionelle Kontrolle, Zellzustandsübergänge und durch das Mikromilieu getriebene Phänotypen zu untersuchen.

WISP-2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen WISP2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

WISP-2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des WISP2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der WISP2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen WISP-2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native WISP2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von WISP-2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des WISP-2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem WISP2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.