WIPI-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405215

Visão geral

WIPI1 codifica a WIPI-1, uma proteína de repetições WD que se liga ao fosfatidilinositol 3-fosfato (PI3P) e atua como um efetor-chave do complexo PI3K de classe III durante a biogênese de autofagossomos. A WIPI-1 participa de eventos iniciais da autofagia ao recrutar a maquinaria ATG a jusante para fagóforos nascentes e ao sustentar a remodelação de membranas necessária para a maturação do autofagossomo. Por meio de seu papel na autofagia e na adaptação ao estresse celular, a WIPI-1 é relevante para vias que regulam a proteostase, o controle de qualidade de organelas e a sinalização de nutrientes. A desregulação de componentes da autofagia, incluindo proteínas da família WIPI, tem sido associada, em modelos experimentais, a alterações na sobrevivência de células tumorais, a processos neurodegenerativos e à sinalização inflamatória.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO WIPI-1 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene WIPI1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do WIPI1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do WIPI1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína WIPI-1.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de WIPI1 para a investigação da sinalização de WIPI-1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) WIPI1 críticos para a função WIPI-1
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos WIPI1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo WIPI-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo WIPI-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus WIPI1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo WIPI-1 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR WIPI-1 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia WIPI1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo WIPI1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.