WIPI-1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405215

Panoramica

WIPI1 codifica WIPI-1, una proteina a ripetizioni WD che lega il fosfatidilinositolo 3-fosfato e funge da effettore chiave del complesso PI3K di classe III durante la biogenesi degli autofagosomi. WIPI-1 partecipa alle fasi precoci dell’autofagia reclutando la macchina ATG a valle sui fagofori nascenti e supportando il rimodellamento di membrana necessario alla maturazione dell’autofagosoma. Grazie al suo ruolo nell’autofagia e nell’adattamento allo stress cellulare, WIPI-1 è rilevante per le vie che regolano la proteostasi, il controllo qualità degli organelli e la segnalazione dei nutrienti. La disregolazione dei componenti dell’autofagia, incluse le proteine della famiglia WIPI, è stata associata in modelli sperimentali a una sopravvivenza alterata delle cellule tumorali, a processi neurodegenerativi e alla segnalazione infiammatoria.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO WIPI-1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene WIPI1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del WIPI1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto WIPI1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina WIPI-1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di WIPI1 per lo studio della segnalazione di WIPI-1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni WIPI1 critici per la funzione di WIPI-1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di WIPI1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal WIPI-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal WIPI-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus WIPI1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal WIPI-1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR WIPI-1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia WIPI1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio WIPI1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.