Plasmide CRISPR/Cas9 KO WIBG (h): sc-409500

Présentation

PYM1 code la protéine humaine WIBG, un composant de la biologie des ribonucléoprotéines messagères impliqué dans la coordination de la régulation génique post‑transcriptionnelle. WIBG a été associée à des processus du métabolisme de l’ARN qui influencent la stabilité des transcrits et la traduction, contribuant à un contrôle dynamique de la production protéique dans les cellules en prolifération et en différenciation. Par ces fonctions, WIBG s’inscrit à l’interface de voies contrôlant l’homéostasie du protéome et les réponses au stress cellulaire, souvent perturbées dans des contextes pertinents pour les maladies. La dérégulation du traitement des ARNm et de la traduction est associée à divers états pathologiques, ce qui fait de WIBG une cible utile pour des études mécanistiques du contrôle de l’expression génique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO WIBG (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PYM1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PYM1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PYM1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine WIBG.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PYM1 pour l'étude de la signalisation de WIBG, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PYM1 essentiels à la fonction de WIBG
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PYM1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le WIBG plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le WIBG plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PYM1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le WIBG plasmide HDR (h) et le WIBG (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PYM1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PYM1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.