Plásmido Doble Nickase (h) WDR77: sc-403890-NIC

WDR77 (también conocido como MEP50) codifica una proteína andamiaje con repeticiones WD que actúa como cofactor obligatorio de PRMT5, facilitando la dimetilación simétrica de residuos de arginina en histonas y en diversas proteínas de unión a ARN. A través de este complejo metilosoma PRMT5–WDR77, WDR77 influye en la organización de la cromatina, el control transcripcional y el empalme (splicing) del pre-ARNm, con efectos posteriores sobre la progresión del ciclo celular y los programas de linaje. WDR77 también se ha vinculado con la corre-regulación del receptor de andrógenos y con una señalización más amplia de receptores nucleares, conectándola con vías que determinan estados de proliferación y diferenciación. La actividad desregulada de PRMT5/WDR77 se estudia con frecuencia en biología del cáncer y en contextos del desarrollo, donde los defectos epigenéticos y de procesamiento de ARN contribuyen a redes de expresión génica alteradas.

WDR77 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus WDR77 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de WDR77. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de WDR77. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con WDR77 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.