WDR24 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-407847

Übersicht

WDR24 kodiert ein WD-Repeat-haltiges Protein, das als zentrale Komponente des GATOR2-Komplexes fungiert, einem Schlüsselregulator der aminosäureabhängigen Kontrolle der mTORC1-Signalübertragung. Durch die Modulation der GATOR1-Aktivität trägt WDR24 dazu bei, die Nährstoffverfügbarkeit mit der lysosomalen Aktivierung von mTORC1 zu koordinieren, was Autophagie, Proteinsynthese und zelluläre Wachstumsprogramme beeinflusst. Störungen dieser Achse können die metabolische Homöostase und Stressantworten verändern und verknüpfen WDR24-assoziierte Signalwege mit Mechanismen, die häufig im Kontext des Krebsstoffwechsels, der Neurobiologie und anderer Bereiche untersucht werden, in denen eine Fehlregulation von mTORC1 eine Rolle spielt. WDR24 ist daher relevant für die Aufklärung der Nährstoff-Signalschaltkreise und ihrer nachgeschalteten transkriptionellen und translationalen Outputs.

Das WDR24 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des WDR24-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des WDR24-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von WDR24 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die WDR24-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von WDR24-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der WDR24-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf WDR24-Exone abzielen, die für die WDR24-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere WDR24-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom WDR24 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom WDR24 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des WDR24-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das WDR24 HDR-Plasmid (h) und WDR24 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von WDR24-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten WDR24-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.